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發(fā)布時(shí)間： 2022-05-29 點(diǎn)擊次數(shù)： 1622次DNA提取技術(shù)服務(wù)是一種使用破壁酶(Lyticase)消化去除酵母細(xì)胞壁，然后采用一種新型的酵母質(zhì)粒純化柱實(shí)現(xiàn)從酵母細(xì)胞中進(jìn)行小量質(zhì)?？焖俪樘岬脑噭┖?。1、無(wú)需酚氯仿抽提，無(wú)需酒精沉淀，12個(gè)樣品只需約1-1.5小時(shí)即可完成。2、試劑盒提供了破壁酶(Lyticase)，酵母收集后，加入Lyticase消化去除細(xì)胞壁，接著采用傳3統(tǒng)堿裂法裂解細(xì)胞，然后將獲得的上清液轉(zhuǎn)移至結(jié)合柱結(jié)合DNA，經(jīng)過(guò)離心快速洗滌，最后用洗脫液洗脫出酵母質(zhì)粒DNA。3、由于采用了高濃度的破壁酶，無(wú)需再使用玻璃珠，可以避免因?yàn)椴Ａе榈臋C(jī)械作用帶來(lái)的酵母基因組DNA污染。DNA提取技術(shù)服務(wù)本實(shí)驗(yàn)方法的基本原理是，在高鹽狀態(tài)下，硅膠膜專一性地吸附DNA；而在低鹽或水溶液狀態(tài)下，DNA被洗脫下來(lái)。此法簡(jiǎn)便快捷，可在30分鐘內(nèi)同時(shí)提純二十多個(gè)樣品。從3～5ml培養(yǎng)過(guò)夜的含高拷貝質(zhì)粒的菌液中可以獲得10～20μg高純度的質(zhì)粒DNA，用于酶切、轉(zhuǎn)化、DNA自動(dòng)測(cè)序和手工測(cè)序等。DNA提取技術(shù)服務(wù)純化柱可以結(jié)合的質(zhì)粒量的上限約為20微克。質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量依賴于酵母攜帶質(zhì)粒的拷貝數(shù)，酵母菌株以及生長(zhǎng)條件。通常酵母質(zhì)粒的拷貝數(shù)較低，1.5-5ml培養(yǎng)過(guò)夜的酵母抽提獲得的質(zhì)粒DNA量約為1-3微克左右。高拷貝酵母質(zhì)粒抽提時(shí)的得率會(huì)大大提高。抽提所得質(zhì)粒的量與酵母培養(yǎng)濃度、質(zhì)粒拷貝數(shù)、酵母品系等因素有關(guān)。
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