穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選實驗

穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選實驗目的:

 穩(wěn)轉(zhuǎn)株長用于基因研究方向，便于長期觀察和檢驗基因?qū)τ诩毎δ芤约暗鞍椎南嗷プ饔谩?/span>

一般轉(zhuǎn)染實驗方法：

用轉(zhuǎn)染質(zhì)?；虿《厩秩镜姆椒▽嫿ê玫暮谢虻妮d體導入細胞，根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標志選用相應的試劑進行篩選混合陽性克隆。在陽性混合克隆的基礎上，得到單細胞長出的陽性單克隆，繼而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。

一般篩選方法：

1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩(wěn)定細胞系

對大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染效率較低。對于基因過表達，如果轉(zhuǎn)染效率達到40%，基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗，對轉(zhuǎn)染效率要求遠遠高于基因過表達，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。

另外，質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項目；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低，穩(wěn)定細胞株構建耗時耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。

2、病毒感染篩選穩(wěn)定細胞株

病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩(wěn)定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄、高效表達、宿主范圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細胞株的理想載體。

服務內(nèi)容：1、穩(wěn)定：15代以內(nèi)細胞穩(wěn)定表達。

      2、迅速：一般控制在1個月以內(nèi)完成構建。

      3、經(jīng)濟：價格實惠。

      4、質(zhì)量：對外源基因進行嚴格鑒定。

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